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猕猴桃籽油抗衰老作用的实验研究
时间:2011-10-8 17:34:26   浏览次数:次  

 

摘 要目的:探讨猕猴桃籽油延缓衰老的作用机理。方法:30只SD大鼠随机分为3组。对照组:每鼠每日灌服生理盐水和背部皮下注射150mg/kg.bw生理盐水;模型组:每鼠每日灌服生理盐水和背部皮下注射150mg/kg.bw25%D-半乳糖溶液;猕猴桃籽油干预组:每鼠每日灌服猕猴桃籽油0.670g/kg.bw和背部皮下注射150mg/kg.bw25%D-半乳糖溶液;每组时间均为8周。8周后测定各组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA) 含量及皮肤组织羟脯氨酸的含量。结果:与模型组相比,干预组血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性增高,丙二醛(MDA)含量则显著下降,皮肤羟脯氨酸含量提高,差异均具有显著性(P<0.05)。结论:猕猴桃籽油可通过SOD、MDA及羟脯氨酸的调节而起到延缓衰老的作用。
关键词猕猴桃籽油;D-半乳糖;超氧化物歧化酶;丙二醛;羟脯氨酸;抗衰老
  猕猴桃具有很高的营养、医疗、保健、观赏等开发利用价值,被誉为“水果之王”、“世界珍果”,是目前世界各国竞相开发的果品之一[1]。相关科研、医疗和卫生部门研究结果表明,采用超临界CO2萃取技术从猕猴桃籽中提取的猕猴桃籽油具有辅助降低血脂、软化血管和延缓衰老等功效,在医学、保健食品和美容护肤品领域具有非常广泛的用途[2]。本研究通过观察猕猴桃籽油对D-半乳糖拟衰老大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和皮肤羟脯氨酸含量的影响,探讨猕猴桃籽油延缓衰老的机理。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
  猕猴桃籽油,由湖南老爹农业科技开发股份有限公司提供;实验动物,SD健康大鼠30只,清洁级,雄性,双耳无缺损,3-4月龄,体重180-220g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供;SOD、MDA、羟脯氨酸测定试剂盒,购于南京建成生物工程研究所;D-半乳糖, 由美国DEBET公司提供;其余试剂均为市售分析纯。
  主要仪器有721 分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式高速离心机等。
1.2 实验方法
1.2.1 实验分组与给药 SD 大鼠适应性喂养一周后,随机分为对照组、模型组、猕猴桃籽油干预组,每组10只。上述各组均在相同条件下喂养,室温控制为15-18℃,湿度70%左右,自由摄取标准饲料(华中科技大学医学院动物中心提供),饮用干净自来水。对照组每鼠按150mg/kg.bw每日背部皮下注射生理盐水1 次(无菌操作),连续8周。模型组、猕猴桃籽油干预组,每鼠按150mg/kg.bw每日背部皮下注射25%D-半乳糖溶液1 次(无菌操作),连续8周[4],建立衰老模型。猕猴桃籽油干预组每鼠每日按0.670g/kg.bw灌服猕猴桃籽油。模型组和对照组均灌服等体积生理盐水。
1.2.2 标本采集 试验8周结束时,大鼠吸入乙醚麻醉后,用眼科镊迅速摘除单侧眼球,肝素抗凝管收集血液3ml,静置30min后,以3000r/min离心10min,吸取血清放入EP管中-20℃保存,测SOD活性及MDA含量。取背部正中皮肤,用脱毛剂脱去鼠毛作10%皮肤组织匀浆,测皮肤羟脯氨酸含量。
1.2.3 标本检测 血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、皮肤组织匀浆羟脯氨酸含量测定参照南京建成生物工程公司试剂盒说明方法测定。
1.2.4 统计学处理 所有数据均以均数±标准差(±s)表示,采用SPSS12.0统计分析软件以t检验进行统计分析,以P<0.05作为差异性显著的标准。
2 结果与分析
2.1 各组大鼠血清中SOD、MDA含量
  各组大鼠血清SOD、MDA含量的检测结果见表1 。
表1 各组大鼠血清SOD、MDA 的含量( ±s)
组别
动物数(只)
SOD(NU/ml)
MDA(nmol/mol)
对照组
10
144.29±4.33
17.19±0.76
模型组
10
107.35±3.25
30.16±0.92
干预组
10
131.37±3.03
23.21±1.26
由表1可见,衰老大鼠血清SOD活性下降,与对照组大鼠相比有显著性差异( P<0.05),干预组大鼠血清SOD 活性显著高于衰老大鼠(P<0.05);衰老大鼠血清MDA含量较对照组大鼠明显升高(P<0.05),干预组大鼠血清MDA活性显著低于衰老大鼠(P<0.05)。
2.2 各组大鼠皮肤组织羟脯氨酸含量
各组大鼠皮肤组织羟脯氨酸含量结果见表2。
表2 各组大鼠皮肤羟脯氨酸的含量( ±s)

组别
动物数(只)
羟脯氨酸(μg/mg组织)
对照组
10
2.55±0.08
模型组
10
1.31±0.06
干预组
10
1.81±0.05

  由表2可见,衰老大鼠皮肤组织的羟脯氨酸含量减少,与对照组大鼠相比有显著性差异(P<0.05),干预组大鼠皮肤组织羟脯氨酸含量明显高于衰老大鼠 (P<0.05)。
3 讨论
  衰老是生物体全身各组织、器官的退行性变化,是诸多病理、生理过程综合作用的结果。衰老的代谢学说认为,新陈代谢是生命的本质,也是生命活动的基础,衰老是机体代谢性障碍的结果。糖代谢在三大物质代谢中具有很重要的意义,其紊乱必然会引起心、肝、肾和脑等重要器官代谢异常,最终出现衰老。在一定时间内,连续给动物注射大剂量的D-乳糖,使机体细胞内半乳糖浓度增高,在醛糖还原酶的催化下,还原成半乳糖醇,这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内,影响正常渗透压,导致细胞肿胀、功能障碍、代谢紊乱【3】, 使得动物多种组织、器官形态及生理、生化指标出现明显变化,呈现与自然衰老相似的改变,这一过程与自然衰老相似【4】,该模型因造模本身周期短、模型稳定被广泛应用于与衰老有关的各种实验研究。
  研究还表明,随着机体年龄的增加,其抗氧化能力呈增龄性变化,大量自由基为内因引起的脂质过氧化反应与细胞的衰老、死亡乃至整个机体的衰老进程都有着密切的关系【5】,表现为SOD的活性随增龄降低,其活性与物种的寿命呈正相关,它在保护脑功能、延缓衰老方面发挥着重要作用【6】。而MDA是自由基损伤不饱和脂肪酸生成的脂类过氧化分解产物,MDA含量随增龄升高也可以间接证明自由基水平升高及反映机体活性氧损伤效应【7】。本实验结果证实,通过D-半乳糖诱导的衰老模型组大鼠血清SOD活性明显低于对照组(P<0.05),而MDA含量则明显高于对照组(P<0.05)。而服用猕猴桃籽油的干预组血清SOD活性明显高于模型组,干预组的血清MDA的含量也明显低于模型组。
  由于衰老, 机体胶原蛋白多肽链间的共价交联程度增加, 使得皮肤变得僵硬少弹性,通透性低,胶原代谢率降低,使胶原组织中的游离肽或结合肽的羟脯氨酸含量降低【8】。实验结果也证实,通过D-半乳糖诱导的衰老模型组大鼠皮肤羟脯氨酸含量明显低于正常组(P<0.05),而服用猕猴桃籽油的干预组大鼠的羟脯氨酸含量明显高于衰老组(P<0.05)。
  本试验结果表明猕猴桃籽油可以通过提高血清SOD活性和降低MDA含量而提高整个机体的抗氧化能力,显著改善或调整衰老细胞的新陈代谢,提高细胞的生命力,而且猕猴桃籽油还可以提高皮肤羟脯氨酸含量,增加皮肤弹性,起到同时延缓机体和皮肤衰老进程的多重抗衰老作用。
  综上所述,猕猴桃籽油有很强的抗衰老作用,长期服用可达到延缓衰老的目的,其作用机理可能与猕猴桃籽油所含成分有关。猕猴桃籽油的主要成分是α-亚麻酸和亚油酸,含有一定量的维生素E及微量元素硒等物质[9]。有许多研究表明,α-亚麻酸能有效清除体内过多的自由基[10],维生素E本身也有抗氧化作用,进而达到有效延缓衰老的作用。
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